Centro di Referenza Nazionale per Anisakiasis (C.re.N.A.)
Valutazione dei nematodi parassiti appartenenti alla famiglia Anisakidae da due passaggi::
- Identificazione delle larve (memorizzato nel 70% di alcol) da pesce ispezione e caratterizzazione morfologica mediante microscopia ottica. L identificazione dei parassiti è effettuata mediante test fenotipici. Il primo consiste nell’osservazione microscopica e confronto con caratteristiche morfologiche chiavi di identificazione, per genere identificazione dei nematodi della famiglia Anisakidae.
- Caratterizzazione molecolare PCR-RFLP o multiplex PCR della sua-regione di DNA, il mtDNA COX2 e/o la sua regione di DNA le analisi di sequenza. Questi metodi sono in grado di identificare le specie di Anisakidae parassiti come ad esempio Anisakis tipo I (A. simplex s.s., A. pegreffii, A. typica, A. ziphidarum, A. nascetti, A. berlandi) e Anisakis tipo II (A. physeteris, A. brevispiculata, A. paggiae), Pseudoterranova (P. decipiens s.s., P. krabbei, P. bulbosa, P. azarasi, P. cattani), Contracaecum (C. osculatum, C. rudolphii) e Hysterothylacium (H. aduncum, H. fabri) generi. Tempo reale-PCR sono effettuate per l’identificazione di Anisakids traccia di DNA come Anisakis spp e Pseudoterranova spp in diversi prodotti ittici trasformati. Il sequenziamento è effettuata per confermare la diagnosi e per la specie/ceppo la digitazione.
Dettagli degli esami sono riportati nelle tabelle seguenti.
Lo standard delle procedure operative (POS/PdP) sono certificate secondo la norma UNI CEI EN ISO/IEC 17025:2005.
Molecular and Optical-microscopy diagnostic
Pathogen | Matrix | Method | POS/PdP |
Anisakidae larvae
|
Viscera, coelomic cavity and muscle tissue of fish | Optical-microscopy observation | POS-CRENA 03 |
Anisakis spp | Anisakis larvae | PCR-RFLP | POS CRENA 02 |
Anisakis spp, Pseudoterranova spp | Processed fish products | Real Time PCR | POS CRENA 05 |
Pseudoterranova spp | Pseudoterranova larvae | mtDNA cox2 sequence analyses | POS CRENA 06 |
Nematodes of the Anisakidae family (Anisakis, Pseudoterranova, Hysterothylacium, Contracaecum osculatum, Contracaecum rudolphii) | Anisakidae larvae | Multiplex PCR | PdP CRENA 07 |
Nematodes of the Anisakidae family | Purified PCR products | PCR Sequencing | – |
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